測定法別離精細汲取上述兩種濃度的綜合比較品溶液各20μl，供試品溶液5～ 20μl，訓練注入液相色譜儀，健身徐州中泉房地產開發有限公司測定，器亞用外標兩點法對數方程計較，美體即得

　　測定法別離精細汲取上述兩種濃度的育登比較品溶液各20μl，供試品溶液5～ 20μl，綜合注入液相色譜儀，訓練測定，健身用外標兩點法對數方程計較，器亞即得。美體

　　測定法別離精細汲取上述兩種濃度的育登比較品溶液各20μl，供試品溶液5～ 20μl，綜合注入液相色譜儀，訓練測定，健身用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　供試品溶液的制備取益母草顆粒，混勻，研細，取約0.7g，精細稱定，置100ml 燒杯中，加熱水15ml使消融，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置好的強酸性陽 離子交流樹脂柱(內徑1.5cm，柱高5cm)，用水200ml洗脫，棄去水液，再用甲醇 -氨水(70∶30)100ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移至10ml 量瓶中，加活動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

　　供試品溶液的制備取益母草顆粒，研勻，取0.8g，精細稱定，置100ml燒杯 中，加熱水20ml使消融，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置好的強酸性陽離子 交流樹脂柱(內徑1cm，柱高5cm)，用水200ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水 (70∶30)200ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移至10ml量 瓶中，加活動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

　　測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～ 20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　色譜前提與體系合用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以乙腈-水 (2∶98)為活動相；流速為每分鐘0.2ml；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度：95 ℃，氛圍流速：1.9L/min)。

　　測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～ 20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　比較品溶液的制備取105℃枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，精細稱定， 加活動相制成每1ml別離含0.05mg、0.1mg的溶液，即得。

　　比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，精細 稱定，加活動相制成每1ml別離含0.05mg、0.15mg的溶液，即得。

　　40、中， 加熱水20ml使消融， 用稀鹽酸調pH值至13， 經由過程已處置好的強酸性陽離子交流樹脂 柱 ( 內徑 1cm， 柱高 5cm)， 用水 100ml 洗脫， 棄去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)150ml 洗 脫， 搜集洗脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶中， 加活動相至刻度， 搖勻， 用微孔濾膜 (0.45m) 濾過， 即得。 0093 測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 0094 施行例 8 益母草口服液含量測定辦法 0095 色譜前提與體系合用。

　　31、 1 3， 經由過程已處置好的強酸性陽離子交流樹脂柱 ( 內 徑 1cm， 柱高 5cm)， 用水 200ml 洗脫， 棄去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)200ml 洗脫， 搜集 洗脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶中， 加活動相至刻度， 搖勻， 用微孔濾 膜 (0.45m) 濾過， 即得。 0068 測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 0069 施行例 3 益母草片含量測定辦法 0070 色譜前提與體系合用性實驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以乙腈。

　　比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，精細 稱定，加活動相制成每1ml別離含0.1mg、0.2mg的溶液，即得。

　　供試品溶液的制備取益母草流浸膏，混勻，取5g，精細稱定，置100ml燒杯 中，加熱水50ml使消融，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置好的強酸性陽離子 交流樹脂柱(內徑2cm，柱高10cm)，用水400ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水 (70∶30)400ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移至10ml量 瓶中，加活動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

　　色譜前提與體系合用性實驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以甲醇-水 (3∶97)為活動相；流速為每分鐘0.8ml；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度：120 ℃，徐州中泉房地產開發有限公司氛圍流速：3L/min)。

　　38、， 即得。 0087 供試品溶液的制備取益母草膏， 混勻， 取 1.5g， 精細稱定， 置 100ml 燒杯中， 加熱水 30ml 使消融， 用稀鹽酸調 pH 值至 1 3， 經由過程已處置好的強酸性陽離子交流樹脂柱 ( 內徑 1.5cm， 柱高 6cm)， 用水 150ml 洗脫， 棄去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)100ml 洗脫， 搜集 洗脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶中， 加活動相至刻度， 搖勻， 用微孔濾 膜 (0.45m) 濾過， 即得。 0088 測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注入液相色譜儀。

　　30、譜前提與體系合用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以乙腈 - 水 (6 94) 為活動相 ； 流速為每分鐘 0.5ml ； 蒸發光散射檢測器檢測 ( 漂移管溫度 ： 90， 空 氣流速 ： 2.8L/min)。 說 明 書 CN 101474249 B6/8 頁 8 0066 比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 精細稱 定， 加活動相制成每 1ml 別離含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即得。 0067 供試品溶液的制備取益母草顆粒， 研勻， 取 0.8g， 精細稱定， 置 100ml 燒杯中， 加熱 水 20ml 使消融， 用稀鹽酸調 pH 值至。

　　關于益母草的質量掌握辦法，在現有手藝中也公然許多，中國藥典2005年版一 部中的益母草及益母草膏尺度均接納薄層掃描法測定鹽酸水蘇堿的含量，但該辦法 操縱啰嗦、檢測活絡度低、反復性欠好，偏差較大；有報導接納高效液相色譜法測 定藥材或制劑中鹽酸水蘇堿的含量，接納了磺酸基鍵合硅膠柱、陽離子交流樹脂柱、 氨基鍵合硅膠柱等色譜柱及紫外檢測的辦法法停止測定，這些辦法中所利用的柱子 不變性較差，紫外波長挑選結尾吸取作為測定波長，樂音大，滋擾較嚴峻，從而使 全部辦法重現性欠好。本創造打破原有文獻公然的質量掌握辦法，含量測定辦法依 據實驗成果表白其精細度、不變性、重現性優良，可以更有用地掌握益母草及其制 劑的產物格量。

　　8、薄層掃描法測定鹽酸水蘇堿的含量， 但該辦法操縱煩 瑣、 檢測活絡度低、 反復性欠好， 偏差較大 ； 有報導接納高效液相色譜法測定藥材或制劑中 鹽酸水蘇堿的含量， 接納了磺酸基鍵合硅膠柱、 陽離子交流樹脂柱、 氨基鍵合硅膠柱等色譜 柱及紫外檢測的辦法法停止測定， 這些辦法中所利用的柱子不變性較差， 紫外波長挑選末 端吸取作為測定波長， 樂音大， 滋擾較嚴峻， 從而使全部辦法重現性欠好。本創造打破原有 文獻公然的質量掌握辦法， 含量測定辦法根據實驗成果表白其精細度、 不變性、 重現性良 好， 可以更有用地掌握益母草及其制劑的產物格量。 創造內容 0004 本創造目標在于供給一種益母草含量測定辦法。。

　　測定法別離汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～20μl，注 入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　比較品溶液的制備取枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，精細稱定，加流 動相制成每1ml別離含0.05mg、0.15mg的溶液，即得。

　　別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液10μl，注入液相 色譜儀。此前提下鹽酸水蘇堿與別的組分到達基線，實際塔板 數按鹽酸水蘇堿計較大于10000，鹽酸水蘇堿保存工夫約為10分鐘，見表1。

　　15、最初用水洗至流出液呈中性。 0023 本創造與公然的辦法停止了比照 ： 比照辦法 1) 用高效液相色譜法測定益母草顆 粒中的鹽酸水蘇堿含量， 接納氨基柱或磺基柱、 紫外檢測器檢測， 選用的波長為紫外結尾吸 收， 基線不不變， 滋擾嚴峻， 且氨基柱或磺基柱易水解， 使柱效低落， 影響別離結果， 見附圖 1 ； 比照辦法 2) 用氨基柱、 蒸發光散射檢測器對鹽酸水蘇堿含量停止測定， 但氨基柱易水 解， 招致嘗試過程當中基線。本創造的辦法選用不變性好的十八烷基硅烷 鍵合硅膠反相色譜柱， 接納 HPLC-ELSD 法對益母草及其制劑中的鹽酸水蘇堿停止含量測定 研討， 成果基線、 別離度好， 見附圖 3。辦法學考證表白， 該法別離結果優良， 辦法線性、 不變性、 反復性、 加樣收受接管率等辦法學考查均契合定量測定的請求。 附圖闡明 0024 附圖 1 氨基柱， 紫外檢測器測定圖譜 說 明 書 CN 101474249 B3/8 頁 5 0025 附圖 2 氨基柱， 蒸發光散射檢測器測定圖譜 0026 附圖 3 十八烷基硅烷鍵合硅膠柱， 蒸發光散射檢測器測定圖譜 0027 上面施行例用于進一步闡明本創造的手藝計劃和手藝結果。 0028 施行例 1 ： 益母草藥材含量測定 0029 儀器 ： 日本島津 LC-10Atvp 高效液相色譜儀， 威瑪龍色譜事情站 ； 美國奧泰 EL。

　　本創造目標在于供給一種益母草含量測定辦法。本創造另外一目標在于供給一種 益母草制劑含量測定辦法。

　　活動相的流速為每分鐘0.1-1ml；蒸發光散射檢測器檢測的漂移管溫度：60-130 ℃，氛圍流速：1.5-3.2L/min。

　　供試品溶液的制備取益母草滴丸內容物，混勻，取0.5g，精細稱定，置100ml 燒杯中，加熱水20ml使消融，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置好的強酸性陽 離子交流樹脂柱(內徑1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脫，棄去水液，再用甲醇- 氨水(70∶30)150ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移至10ml 量瓶中，加活動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

　　實驗前提色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱Agilent ZORBAX SB-Aq 5μm 4.6×250mm色譜柱；活動相：乙腈-水(5∶95)綜合鍛煉健身器，流速：0.3ml/min；漂移管溫度： 75℃，氛圍流速：2.2L/min；柱溫：室溫。

　　39、， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 0089 施行例 7 益母草滴丸含量測定辦法 0090 色譜前提與體系合用性實驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以甲醇 - 水 (4 96) 為活動相 ； 流速為每分鐘 0.8ml ； 蒸發光散射檢測器檢測 ( 漂移管溫度 ： 110， 空 氣流速 ： 2.9L/min)。 0091 比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 精細稱 定， 加活動相制成每 1ml 別離含 0.04mg、 0.08mg 的溶液， 即得。 0092 供試品溶液的制備取益母草滴丸內容物， 混勻， 取 0.5g， 精細稱定， 置 100ml 燒杯 。

　　別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液及不含益母草的 陽性樣品溶液各20μl，注入液相色譜儀。此前提下鹽酸水蘇堿與別的組分到達基線，實際塔板數按鹽酸水蘇堿計較大于10000，鹽酸水蘇堿保存時 間約為10分鐘，見表2。陽性樣品溶液在色譜在響應地位無吸取峰，可見陽性無干 擾。

　　23、陽離子交流 樹脂 ( 國藥團體化學試劑有限公司 )。 0043 樣品 ： 益母草顆粒(批號 ： 1508001)及缺益母草藥材的陽性對還是品， 廣西靈峰藥 業有限公司。 0044 比較品溶液的制備精細稱取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品 10.01mg， 置 10ml 量瓶中， 加活動相使消融并稀釋至刻度， 搖勻 (1.001mg/ml) ； 精細量取 0.5ml、 1.5ml 別離置 10ml 量瓶， 加活動相至刻度， 搖勻， 即得 (50.05g/ml、 150.15g/ ml)。 0045 供試品溶液的制備取益母草顆粒， 混勻， 研細， 取約 0.7g， 精細稱定， 置 100ml。

　　28、品， 之外標兩點法對 數方程計較樣品中鹽酸水蘇堿的含量， 成果見表 3。 0055 表 3 樣品測定成果 0056 0057 闡明本創造的辦法合適于各類益母草制劑的含量測定。 0058 詳細施行例以下 ： 0059 施行例 1 益母草藥材含量測定辦法 0060 色譜前提與體系合用性實驗 ： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以乙腈 - 水 (4 96) 為活動相 ； 流速為每分鐘 0.4ml ； 蒸發光散射檢測器檢測 ( 漂移管溫度 ： 80， 空 氣流速 ： 2.4L/min)。 0061 比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 加活動相 制成每 1ml 別離含 0。

　　18、) ； 精細量取 0.6ml、 2ml 別離置 25ml 量瓶， 加活動相至刻度， 搖勻， 即得 (47.64g/ml、 158.8g/ml)。 0033 供試品溶液的制備取益母草粉末 ( 過三號篩 ) 約 0.5g， 精細稱定， 置具塞錐形瓶 中， 精細參加乙醇 50ml， 密塞， 稱定重量， 加熱回流 1.5 小時， 放冷， 再稱定重量， 加乙醇補足 減失的重量， 搖勻， 濾過。精細量取續濾液 20ml， 水浴蒸干， 殘渣加活動相使消融， 轉移至 10ml 量瓶并稀釋至刻度， 搖勻， 用微孔濾膜 (0.45m) 濾過， 即得。 0034 實驗前提色譜柱 ： 十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱 Ag。

　　41、性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以甲醇 - 水 (6 94) 為活動相 ； 流速為每分鐘 0.3ml ； 蒸發光散射檢測器檢測 ( 漂移管溫度 ： 95， 空 氣流速 ： 2.6L/min)。 說 明 書 CN 101474249 B8/8 頁 10 0096 比較品溶液的制備取 105枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 精細稱定， 加流 動相制成每 1ml 別離含 0.7mg、 0.14mg 的溶液， 即得。 0097 供試品溶液的制備取益母草口服液， 混勻， 精細量取 2ml， 置 100ml 燒杯中， 加熱水 15ml稀釋， 用稀鹽酸調pH值至13， 經由過程已處置好的強酸性陽離子。

　　色譜前提與體系合用性實驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以甲醇-水 (4∶96)為活動相；流速為每分鐘0.8ml；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度：110 ℃，氛圍流速：2.9L/min)。

　　考查了甲醇-水和乙腈-水等差別的活動比擬例及差別的活動相流速，成果活動 相為乙腈-水(1-10∶99-90)或甲醇-水(2-12∶98-88)，流速為每1分鐘0.1ml至1ml， 鹽酸水蘇堿均能別離；以活動相為乙腈-水(2-8∶98-92)或甲醇-水(4-8∶96-92)， 流速為每1分鐘0.2ml至0.8ml，結果更優。

　　比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，加流 動相制成每1ml別離含0.05mg、0.2mg的溶液，即得。

　　36、枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 精細稱 定， 加活動相制成每 1ml 別離含 0.08mg、 0.16mg 的溶液， 即得。 0082 供試品溶液的制備取益母草流浸膏， 混勻， 取 5g， 精細稱定， 置 100ml 燒杯中， 加熱 水 50ml 使消融， 用稀鹽酸調 pH 值至 1 3， 經由過程已處置好的強酸性陽離子交流樹脂柱 ( 內 徑 2cm， 柱高 10cm)， 用水 400ml 洗脫， 棄去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)400ml 洗脫， 收 集洗脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶中， 加活動相至刻度， 搖勻， 用微孔 濾膜 (0.45m) 濾。

　　測定法別離汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～20μl，注 入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　色譜前提與體系合用性實驗：以十八烷基或辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以 1-10∶99-90的乙腈-水或2-12∶98-88的甲醇-水為活動相；蒸發光散射檢測器檢測。

　　高效液相色譜-蒸發光散射測定法包羅色譜前提與體系合用性實驗，比較品溶液 的制備，供試品溶液的制備和鹽酸水蘇堿的含量測定步調。

　　試藥：鹽酸水蘇堿化學比較品(含量測定用，批號：11，中國藥品 生物成品檢定所)，純度經查抄契合含量測定用化學比較品的手藝請求，含量為 99.07％；甲醇(色譜純)，乙腈(色譜純)，水(便宜雙蒸水)，氨水(闡發純)，732 型強酸性陽離子交流樹脂(國藥團體化學試劑有限公司)。

　　21、次， 鹽酸水蘇堿峰面積的相對尺度偏向為 0.52， 表白精 密度較好。不變性實驗 ： 比較品溶液計較相對尺度偏向， 均勻值為 899675， RSD 為 1.69， 表白比較品溶液在 71h 內不變性較好 ； 供試品溶液計較相對尺度偏向， 日內差均勻值為 260766， RSD 為 1.18， 白天差均勻值為 2590279， RSD 為 1.22， 表白供試品溶液在 95h 內 說 明 書 CN 101474249 B4/8 頁 6 不變性較好。反復性實驗 ： 計較鹽酸水蘇堿的含量均勻值為 0.978， 相對尺度偏向 RSD 為 1.56， 表白辦法反復性較好。加樣收受接管率實驗 ： 均勻收受接管率。

　　供試品溶液的制備取益母草粉末1g，置具塞錐形瓶中，參加乙醇50ml，密塞， 稱定重量，加熱回流3小時，放冷，再稱定重量，加乙醇補足減失的重量，搖勻， 濾過。量取續濾液20ml，水浴蒸干，殘渣加活動相使消融，轉移至10ml量瓶并稀 釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，即得。

　　測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～ 20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得亞美體育登錄。

　　7、益母草及其制劑的質量掌握辦法， 出格觸及益母草及其制劑的含量測 定辦法。 布景手藝 0002 益母草， 別號茺蔚、 坤草， 是一種草本動物。性微寒， 味苦辛， 可去瘀生新， 活血調 經， 利尿消腫， 是歷代醫家用來醫治婦科病之要藥。當代醫學研討證實， 益母草含益母草 堿、 鹽酸水蘇堿、 益母草定、 益母草寧等多種生物堿及苯甲酸、 氯化鉀等。 據當代臨床及植物 施行證實， 益母草浸膏及煎劑對子宮有強而耐久的鎮靜感化， 不單能加強其膨脹力， 同時能 進步其慌張度和膨脹率。 0003 關于益母草的質量掌握辦法， 在現有手藝中也公然許多， 中國藥典 2005 年版一部 中的益母草及益母草膏尺度均接納。

　　35、加活動相至刻度， 搖 勻， 用微孔濾膜 (0.45m) 濾過， 即得。 0078 測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 0079 施行例 5 益母草流浸膏含量測定辦法 0080 色譜前提與體系合用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以乙腈 - 水 (7 93) 為活動相 ； 流速為每分鐘 0.2ml ； 蒸發光散射檢測器檢測 ( 漂移管溫度 ： 90， 空 氣流速 ： 2.8L/min)。 說 明 書 CN 101474249 B7/8 頁 9 0081 比較品溶液的制備取五氧化二磷。

　　測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～ 20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　制劑的取樣量為：益母草顆粒取0.1-2g，益母草片及膠囊取0.05-0.5g，益母草 流浸膏取2-10g，益母草膏取0.2-1.5g，益母草口服液量取0.5-5ml，益母草打針液量 取0.1-1ml，其他益母草制劑取樣量按含益母草生藥量0.1-4g而定取樣量。

　　1.一種益母草及含益母草制劑的含量測定辦法，其特性在于，含量測定的步調包羅以下：益母草的含量測定辦法：色譜前提與體系合用性實驗：以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以2-12∶98-88的甲醇-水為活動相；流速為每分鐘0.1-1ml；蒸發光散射檢測器檢測，漂移管溫度：60-130℃，氛圍流速：1.5-3.2L/min；比較品溶液的制備 取枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，加活動相制成每1ml別離含0.05mg、0.15mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 取益母草粉末0.2-1g，置具塞錐形瓶中，參加乙醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流0.5-3小時綜合鍛煉健身器，放冷，再稱定重量，加乙醇補足減失的重量，搖勻亞美體育登錄，濾過；量取續濾液20ml，水浴蒸干，殘渣加活動相使消融，轉移至10ml量瓶并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過亞美體育登錄，即得；測定法 別離汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得；益母草制劑的含量測定辦法：色譜前提與體系合用性實驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以2-12∶98-88的甲醇-水為活動相；流速為每分鐘0.1-1ml；蒸發光散射檢測器檢測，漂移管溫度：60-130℃，氛圍流速：1.5-3.2L/min；比較品溶液的制備 取枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，精細稱定，加活動相制成每1ml別離含0.05mg、0.15mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 取益母草制劑內容物，研細，混勻，精細稱取或量取適當，置100ml燒杯中，加熱水10-50ml使消融，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置好內徑1～2cm，柱高5～10cm的強酸性陽離子交流樹脂柱，用水50～400ml洗脫，棄去水液，再用70∶30的甲醇-氨水50～400ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移至10ml量瓶中，加活動相至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得；測定法 別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，加流 動相制成每1ml別離含0.05mg、0.2mg的溶液，即得。

　　14、現有的制 備辦法制成的制劑， 包羅片劑， 膠囊劑， 顆粒劑， 滴丸劑， 口服液， 煎膏劑、 口含片、 丸劑、 散 劑、 栓劑、 噴霧劑、 滴劑、 貼劑、 打針液等臨床或藥學上可承受的經常使用劑型。 0022 樹脂預處置辦法 ： 將樹脂浸泡在水中12天， 使充實收縮， 裝入層析柱， 先用樹脂 柱體積 10 倍量的 2mol/L 鹽酸以 3ml/min 流速停止交流， 使其變成氫型， 再用水洗至流出液 呈中性， 接著用樹脂柱體積 10 倍量的 1mol/L 氫氧化鈉溶液停止交流， 使其規復鈉型， 然后 再用水洗至流出液呈中性， 接著再用樹脂柱體積10倍量的1mol/L鹽酸停止交流， 使其變成 氫型， 。

　　比較品純度查抄：含量為99.07％，契合含量測定請求，計較時按100％計較。 線性干系考查：回歸方程為：LnA＝1.58LnC+13.84，r＝0.9992。表白鹽酸水蘇堿進樣 量在0.4004～4.004μg范疇外線性干系優良。精細度實驗：均勻值為3245634，RSD 為0.52％，表白精細度較好。不變性實驗：表白供試品溶液在72h內不變性較好。 反復性實驗：均勻值為19.58mg/袋，RSD為0.97％，表白辦法反復性較好。加樣回 收率實驗：均勻收受接管率為99.82％，RSD為1.00％，表白辦法收受接管率較好。

　　測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～ 20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　色譜前提與體系合用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以乙腈-水 (6∶94)為活動相；流速為每分鐘0.5ml；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度：90℃， 氛圍流速：2.8L/min)。

　　色譜前提與體系合用性實驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以乙腈-水 (4∶96)為活動相；流速為每分鐘0.4ml；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度：80 ℃，氛圍流速：2.4L/min)。

　　線性干系考查：得回歸方程為：LnA＝1.58LnC+13.84，r＝0.9992。表白鹽酸水蘇 堿進樣量在0.4004～4.004μg范疇外線性干系優良，可用外標兩點法對數方程停止測 定和計較。精細度實驗：反復進樣5次，鹽酸水蘇堿峰面積的相對尺度偏向為0.52％， 表白精細度較好。不變性實驗：比較品溶液計較相對尺度偏向，均勻值為899675， RSD為1.69％，表白比較品溶液在71h內不變性較好；供試品溶液計較相對尺度偏 差，日內差均勻值為260766，RSD為1.18％，白天差均勻值為2590279，RSD為1.22％， 表白供試品溶液在95h內不變性較好。反復性實驗：計較鹽酸水蘇堿的含量均勻值 為0.978％，相對尺度偏向RSD為1.56％，表白辦法反復性較好。加樣收受接管率實驗： 均勻收受接管率為103.67％，RSD為1.68％。

　　24、 燒杯 中， 加熱水15ml使消融， 用稀鹽酸調pH值至13， 經由過程已處置好的強酸性陽離子交流樹脂 柱(內徑1.5cm， 柱高5cm)， 用水200ml洗脫， 棄去水液， 再用甲醇-氨水(7030)100ml洗 脫， 搜集洗脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶中， 加活動相至刻度， 搖勻， 用微孔濾膜 (0.45m) 濾過， 即得。 0046 陽性樣品溶液的制備陽性樣品溶液是按處方比例稱取除益母草外其他輔料， 按制 法制成益母草陽性樣品， 再取此陽性樣品按上述 “供試品溶液的制備” 辦法制備不含益母草 的陽性樣品溶液。 0047 實驗前提色譜柱 ： 十八烷基硅烷鍵合硅膠。

　　考查了甲醇-水和乙腈-水等差別的活動比擬例及差別的活動相流速，成果活動 相為乙腈-水(1-10∶99-90)或甲醇-水(2-12∶98-88)，流速為每1分鐘0.1ml至1ml， 鹽酸水蘇堿均能別離；以活動相為乙腈-水(2-8∶98-92)或甲醇-水(4-8∶96-92)， 流速為每1分鐘0.2ml至0.8ml，結果更優。

　　樹脂預處置辦法：將樹脂浸泡在水中1～2天，使充實收縮，裝入層析柱，先用 樹脂柱體積10倍量的2mol/L鹽酸以3ml/min流速停止交流，使其變成氫型，再用 水洗至流出液呈中性，接著用樹脂柱體積10倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液停止交流， 使其規復鈉型，然后再用水洗至流出液呈中性，接著再用樹脂柱體積10倍量的 1mol/L鹽酸停止交流，使其變成氫型，最初用水洗至流出液呈中性。

　　測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～ 20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　6、， 經由過程已處置好內徑 1 2cm， 柱 高 5 10cm 的強酸性陽離子交流樹脂柱， 用水 50 400ml 洗脫， 棄去水液， 再用 70 30 的甲醇 - 氨水 50 400ml 洗脫， 搜集洗脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶 中， 加活動相至刻度， 搖勻， 用 0.45m 微孔濾膜濾過， 即得 ； 測定法 別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20l， 供試品溶液520l， 注 入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得綜合鍛煉健身器。 權 利 要 求 書 CN 101474249 B1/8 頁 3 益母草及其制劑的質量檢測辦法 創造范疇 0001 本創造觸及。

　　11、CN 101474249 B2/8 頁 4 0012 活動相的流速為每分鐘 0.1-1ml ； 蒸發光散射檢測器檢測的漂移管溫度 ： 60-130， 氛圍流速 ： 1.5-3.2L/min。 0013 益母草制劑的含量測定辦法以下 ： 0014 色譜前提與體系合用性實驗以十八烷基或辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以 1-10 99-90 的乙腈 - 水或 2-12 98-88 的甲醇 - 水為活動相 ； 蒸發光散射檢測器檢測。 0015 比較品溶液的制備取枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 精細稱定， 加活動相 制成每 1ml 別離含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即得。 0016 。

　　2、 .HPLC 法測定杜仲降壓片中水蘇堿 的含量 .齊魯藥事 .2006,( 第 05 期 ), 馮旭等 .HPLC-ELSD 測定益母顆粒中鹽酸水 蘇堿的含量. 中成藥 .2008,第30卷(第5期), 附件 2. 余琪等 .益母草中鹽酸水蘇堿的 HPLC 測 定 .中國醫藥產業雜志 .2006, 第 37 卷 ( 第 1 期 ),34-35. (54) 創造稱號 益母草及其制劑的質量檢測辦法 (57) 擇要 本創造公然一種益母草及其制劑的質量掌握 辦法， 是接納高效液相色譜 - 蒸發光散射測定法， 此辦法精細度、 不變性、 重現性優良， 可以有用地 掌握益母草及其制劑的產物格量。 (51)I。

　　33、脫， 棄去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)50ml 洗脫， 搜集洗脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶中， 加活動 相至刻度， 搖勻， 用微孔濾膜 (0.45m) 濾過， 即得。 0073 測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 0074 施行例 4 益母草膠囊含量測定辦法 0075 色譜前提與體系合用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以乙腈 - 水 (2 98) 為活動相 ； 流速為每分鐘 0.2ml ； 蒸發光散射檢測器檢測 ( 漂移管溫度 ： 。

　　45、品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 加活動相 制成每 1ml 別離含 0.05mg、 0.2mg 的溶液， 即得。 0107 供試品溶液的制備取益母草粉末 1g， 置具塞錐形瓶中， 參加乙醇 50ml， 密塞， 稱定 重量， 加熱回流 3 小時， 放冷， 再稱定重量， 加乙醇補足減失的重量， 搖勻， 濾過。量取續濾液 20ml， 水浴蒸干， 殘渣加活動相使消融， 轉移至10ml量瓶并稀釋至刻度， 搖勻， 用0.45m的 微孔濾膜濾過， 即得。 0108 測定法別離汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注 入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 說 明 書 CN 101474249 B1/3 頁 11 附圖 1 氨基柱， 紫外檢測器測定圖譜 說 明 書 附 圖 CN 101474249 B2/3 頁 12 附圖 2 氨基柱， 蒸發光散射檢測器測定圖譜 說 明 書 附 圖 CN 101474249 B3/3 頁 13 附圖 3 十八烷基硅烷鍵合硅膠柱， 蒸發光散射檢測器測定圖譜 說 明 書 附 圖 。

　　17、SD2000ES 蒸發光散射檢測器 ； 梅特勒 - 托利多 AB265-S 電子天平。 0030 試藥 ： 鹽酸水蘇堿化學比較品 ( 含量測定用， 批號 ： 11， 中國藥品生物 成品檢定所 )， 純度經查抄契合含量測定用化學比較品的手藝請求， 含量為 99.15 ； 乙腈 ( 色譜純 )， 水 ( 便宜雙蒸水 )， 乙醇 ( 闡發純 )。 0031 樣品 ： 益母草 ( 批號 ： 080701)。 0032 比較品溶液的制備精細稱取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品 19.85mg， 置 10ml 量瓶中， 加活動相使消融并稀釋至刻度， 搖勻 (1.985mg/ml。

　　32、 - 水 (8 92) 為活動相 ； 流速為每分鐘 0.1ml ； 蒸發光散射檢測器檢測 ( 漂移管溫度 ： 70， 空 氣流速 ： 1.8L/min。 0071 比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 精細稱 定， 加活動相制成每 1ml 別離含 0.1mg、 0.2mg 的溶液， 即得。 0072 供試品溶液的制備取益母草片， 撤除包衣， 研細， 混勻， 取 0.2g， 精細稱定， 置 100ml 燒杯中， 加熱水 10ml 使消融， 用稀鹽酸調 pH 值至 1 3， 經由過程已處置好的強酸性 陽離子交流樹脂柱 ( 內徑 1cm， 柱高 5cm)， 用水 100ml 洗。

　　色譜前提與體系合用性實驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以乙腈-水(8∶ 92)為活動相；流速為每分鐘0.1ml；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度：70℃， 氛圍流速：1.8L/min。

　　比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，精細 稱定，加活動相制成每1ml別離含0.04mg、0.08mg的溶液，即得。

　　儀器：日本島津LC-10Atvp高效液相色譜儀，威瑪龍色譜事情站；美國奧泰ELSD 2000ES蒸發光散射檢測器；梅特勒-托利多AB265-S電子天平。

　　色譜前提與體系合用性實驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以乙腈-水 (1∶99)為活動相；流速為每分鐘1ml；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度：130 ℃，氛圍流速：3.2L/min)。

　　供試品溶液的制備取益母草膠囊內容物，研細，混勻，取0.2g，精細稱定， 置100ml燒杯中，加熱水10ml使消融，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置好的 強酸性陽離子交流樹脂柱(內徑1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脫，棄去水液，再 用甲醇-氨水(70∶30)80ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移 至10ml量瓶中，加活動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

　　19、ilent ZORBAX SB-Aq 5m4.6250mm ； 活動相 ： 乙腈 - 水 (5 95)， 流速 ： 0.3ml/min ； 漂移管溫度 ： 75， 氛圍流 速 ： 2.2L/min ； 柱溫 ： 室溫。 0035 別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 10l， 注入液相 色譜儀。此前提下鹽酸水蘇堿與別的組分到達基線， 實際塔板數按鹽 酸水蘇堿計較大于 10000， 鹽酸水蘇堿保存工夫約為 10 分鐘， 見表 1。 0036 表 1 實際塔板數、 別離度、 保存工夫數據 0037 0038 考查了甲醇 - 水和乙腈 - 水等差別的。

　　供試品溶液的制備取益母草制劑內容物，研細，混勻，精細稱取或量取適當， 置100ml燒杯中，加熱水10-50ml使消融，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置 好的強酸性陽離子交流樹脂柱，用水50～400ml洗脫，棄去水液，再用70∶30的甲 醇-氨水50～400ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移至10ml 量瓶中，加活動相至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，即得。

　　本創造中所述的益母草制劑是指益母草作為質料藥或質料藥之一，根據現有的 制備辦法制成的制劑，包羅片劑，膠囊劑，顆粒劑，滴丸劑，口服液，煎膏劑、口 含片、丸劑、散劑、栓劑、噴霧劑、滴劑、貼劑、打針液等臨床或藥學上可承受的 經常使用劑型。

　　色譜前提與體系合用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以甲醇-水 (6∶94)為活動相；流速為每分鐘0.3ml；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度：95 ℃，氛圍流速：2.6L/min)。

　　42、交流樹脂柱(內徑1cm， 柱高 5cm)， 用水 50ml 洗脫， 棄去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)50 200ml 洗脫， 搜集洗 脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶中， 加活動相至刻度， 搖勻， 用微孔濾膜 (0.45m) 濾過， 即得。 0098 測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 0099 施行例 9 益母草打針液含量測定辦法 0100 色譜前提與體系合用性實驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以甲醇 - 水 (3 97) 為活動相 ； 流。

　　12、供試品溶液的制備取益母草制劑內容物， 研細， 混勻， 精細稱取或量取適當， 置 100ml燒杯中， 加熱水10-50ml使消融， 用稀鹽酸調pH值至13， 經由過程已處置好的強酸性陽 離子交流樹脂柱， 用水 50 400ml 洗脫， 棄去水液， 再用 70 30 的甲醇 - 氨水 50 400ml 洗脫， 搜集洗脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶中， 加活動相至刻度， 搖 勻， 用 0.45m 的微孔濾膜濾過， 即得。 0017 測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 。

　　陽性樣品溶液的制備陽性樣品溶液是按處方比例稱取除益母草外其他輔料， 按制法制成益母草陽性樣品，再取此陽性樣品按上述“供試品溶液的制備”辦法制 備不含益母草的陽性樣品溶液。

　　測定法別離汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～20μl，注 入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　供試品溶液的制備取益母草粉末(過三號篩)約0.5g，精細稱定，置具塞錐 形瓶中，精細參加乙醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1.5小時，放冷，再稱定 重量，加乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精細量取續濾液20ml，水浴蒸干，殘 渣加活動相使消融，轉移至10ml量瓶并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm) 濾過，即得。

　　供試品溶液的制備取益母草粉末0.2-1g，置具塞錐形瓶中，參加乙醇50ml， 密塞，稱定重量，加熱回流0.5-3小時，放冷，再稱定重量，加乙醇補足減失的重量， 搖勻，濾過。量取續濾液20ml，水浴蒸干，殘渣加活動相使消融，轉移至10ml量 瓶并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，即得。

　　供試品溶液的制備取益母草膏，混勻，取1.5g，精細稱定，置100ml燒杯中， 加熱水30ml使消融，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置好的強酸性陽離子交流 樹脂柱(內徑1.5cm，柱高6cm)，用水150ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水(70∶30) 100ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移至10ml量瓶中，加流 動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

　　比較品溶液的制備取枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，加活動相制成每 1ml別離含0.05mg、0.15mg的溶液，即得。

　　34、95， 空 氣流速 ： 1.9L/min)。 0076 比較品溶液的制備取鹽酸水蘇堿比較品適當， 精細稱定， 加活動相制成每 1ml 分 別含 0.03mg、 0.15mg 的溶液， 即得。 0077 供試品溶液的制備取益母草膠囊內容物， 研細， 混勻， 取 0.2g， 精細稱定， 置 100ml 燒杯中， 加熱水10ml使消融， 用稀鹽酸調pH值至13， 經由過程已處置好的強酸性陽離子交流 樹脂柱 ( 內徑 1cm， 柱高 5cm)， 用水 100ml 洗脫， 棄去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)80ml 洗脫， 搜集洗脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶中， 。

　　43、速為每分鐘 0.8ml ； 蒸發光散射檢測器檢測 ( 漂移管溫度 ： 120， 空 氣流速 ： 3L/min)。 0101 比較品溶液的制備取 105枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 精細稱定， 加流 動相制成每 1ml 別離含 0.05mg、 0.1mg 的溶液， 即得。 0102 供試品溶液的制備取益母草打針液， 混勻， 精細量取 0.5ml， 置 100ml 燒杯中， 加 水 10ml 稀釋， 用稀鹽酸調 pH 值至 1 3， 經由過程已處置好的強酸性陽離子交流樹脂柱 ( 內徑 1cm， 柱高 5cm)， 用水 50ml 洗脫， 棄去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)50ml 洗脫。

　　10、 加活動相制成每 1ml 別離含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即得。 0010 供試品溶液的制備取益母草粉末 0.2-1g， 置具塞錐形瓶中， 參加乙醇 50ml， 密塞， 稱定重量， 加熱回流 0.5-3 小時， 放冷， 再稱定重量， 加乙醇補足減失的重量， 搖勻， 濾過。量 取續濾液 20ml綜合鍛煉健身器， 水浴蒸干， 殘渣加活動相使消融， 轉移至 10ml 量瓶并稀釋至刻度， 搖勻， 用 0.45m 的微孔濾膜濾過， 即得。 0011 測定法別離汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注 入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 說 明 書 。

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　　本創造公然一種益母草及其制劑的質量掌握辦法，是接納高效液相色譜-蒸發光散射測定法，此辦法精細度、不變性、重現性優良，可以有用地掌握益母草及其制劑的產物格量。

　　比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，精細 稱定，加活動相制成每1ml別離含0.08mg、0.16mg的溶液，即得。

　　3、nt.Cl. (56)比照文件 檢查員 周靜 (19)中華群眾共和國國度常識產權局 (12)創造專利 權益請求書 1 頁 仿單 8 頁 附圖 3 頁 CN 101474249 B1/1 頁 2 1. 一種益母草及含益母草制劑的含量測定辦法， 其特性在于， 含量測定的步調包羅如 下 ： 益母草的含量測定辦法 ： 色譜前提與體系合用性實驗 ： 以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以 2-12 98-88 的甲 醇 - 水為活動相 ； 流速為每分鐘 0.1-1ml ； 蒸發光散射檢測器檢測， 漂移管溫度 ： 60-130， 氛圍流速 ： 1.5-3.2L/min ； 比較品溶液的制備 取枯燥至恒重的。

　　比較品溶液的制備取105℃枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，精細稱定， 加活動相制成每1ml別離含0.7mg、0.14mg的溶液，即得。

　　試藥：鹽酸水蘇堿化學比較品(含量測定用，批號：11，中國藥品 生物成品檢定所)，純度經查抄契合含量測定用化學比較品的手藝請求，含量為 99.15％；乙腈(色譜純)，水(便宜雙蒸水)，乙醇(闡發純)。

　　供試品溶液的制備取益母草片，撤除包衣，研細，混勻，取0.2g，精細稱定， 置100ml燒杯中，加熱水10ml使消融，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置好的 強酸性陽離子交流樹脂柱(內徑1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脫，棄去水液，再 用甲醇-氨水(70∶30)50ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移 至10ml量瓶中，加活動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

　　4、鹽酸水蘇堿比較品適當， 加活動相制成每 1ml 分 別含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即得 ； 供試品溶液的制備 取益母草粉末 0.2-1g， 置具塞錐形瓶中， 參加乙醇 50ml， 密塞， 稱 定重量， 加熱回流 0.5-3 小時， 放冷， 再稱定重量， 加乙醇補足減失的重量， 搖勻， 濾過 ； 量 取續濾液 20ml， 水浴蒸干， 殘渣加活動相使消融， 轉移至 10ml 量瓶并稀釋至刻度， 搖勻， 用 0.45m 的微孔濾膜濾過， 即得 ； 測定法 別離汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20l， 供試品溶液520l， 注入液 相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得 ；。

　　9、 本創造另外一目標在于供給一種益 母草制劑含量測定辦法。 0005 益母草的含量測定辦法以下 ： 0006 益母草的含量測定辦法使用高效液相色譜 - 蒸發光散射測定法 (HPLC-ELSD)。 0007 高效液相色譜 - 蒸發光散射測定法包羅色譜前提與體系合用性實驗， 比較品溶液 的制備， 供試品溶液的制備和鹽酸水蘇堿的含量測定步調。 0008 色譜前提與體系合用性實驗 ： 以十八烷基或辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以 1-10 99-90 的乙腈 - 水或 2-12 98-88 的甲醇 - 水為活動相 ； 蒸發光散射檢測器檢測。 0009 比較品溶液的制備取枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，。

　　比較品溶液的制備精細稱取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品 19.85mg，置10ml量瓶中，加活動相使消融并稀釋至刻度，搖勻(1.985mg/ml)；精 密量取0.6ml、2ml別離置25ml量瓶，加活動相至刻度，搖勻，即得(47.64μg/ml、 158.8μg/ml)。

　　比較品溶液的制備精細稱取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品 10.01mg，置10ml量瓶中，加活動相使消融并稀釋至刻度，搖勻(1.001mg/ml)；精 密量取0.5ml、1.5ml別離置10ml量瓶，加活動相至刻度，搖勻，即得(50.05μg/ml、 150.15μg/ml)。

　　測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各20μl，供試品溶液5～ 20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計較，即得。

　　本創造與公然的辦法停止了比照：比照辦法1)用高效液相色譜法測定益母草 顆粒中的鹽酸水蘇堿含量，接納氨基柱或磺基柱、紫外檢測器檢測，選用的波長為 紫外結尾吸取，基線不不變，滋擾嚴峻，且氨基柱或磺基柱易水解，使柱效低落， 影響別離結果，見附圖1；比照辦法2)用氨基柱、蒸發光散射檢測器對鹽酸水蘇堿 含量停止測定，但氨基柱易水解，招致嘗試過程當中基線。本發 明的辦法選用不變性好的十八烷基硅烷鍵合硅膠反相色譜柱，接納HPLC-ELSD法對 益母草及其制劑中的鹽酸水蘇堿停止含量測定研討，成果基線不變，別離度好，見 附圖3。辦法學考證表白，該法別離結果優良，辦法線性、不變性、反復性、加樣 收受接管率等辦法學考查均契合定量測定的請求。

　　供試品溶液的制備取益母草粉末0.2g，置具塞錐形瓶中，參加乙醇50ml，密 塞，稱定重量，加熱回流0.5小時，放冷，再稱定重量，加乙醇補足減失的重量， 搖勻，濾過。量取續濾液20ml，水浴蒸干，殘渣加活動相使消融，轉移至10ml量 瓶并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，即得。

　　22、為 103.67， RSD 為 1.68。 0040 施行例 2 ： 益母草顆粒含量測定 0041 儀器 ： 日本島津 LC-10Atvp 高效液相色譜儀， 威瑪龍色譜事情站 ； 美國奧泰 ELSD2000ES 蒸發光散射檢測器 ； 梅特勒 - 托利多 AB265-S 電子天平。 0042 試藥 ： 鹽酸水蘇堿化學比較品 ( 含量測定用， 批號 ： 11， 中國藥品生物 成品檢定所 )， 純度經查抄契合含量測定用化學比較品的手藝請求， 含量為 99.07 ； 甲醇 ( 色譜純 )， 乙腈 ( 色譜純 )， 水 ( 便宜雙蒸水 )， 氨水 ( 闡發純 )， 732 型強酸性。

　　供試品溶液的制備取益母草口服液，混勻，精細量取2ml，置100ml燒杯中， 加熱水15ml稀釋，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置好的強酸性陽離子交流樹 脂柱(內徑1cm，柱高5cm)，用水50ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水(70∶30) 50～200ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移至10ml量瓶中， 加活動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

　　25、色譜柱 Agilent ZORBAX SB-Aq5m 4.6250mm色譜柱 ； 活動相 ： 乙腈-水(595)， 流速 ： 0.3ml/min ； 漂移管溫度 ： 75， 氛圍 流速 ： 2.2L/min ； 柱溫 ： 室溫。 0048 別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液及不含益母草的 陽性樣品溶液各 20l， 注入液相色譜儀。此前提下鹽酸水蘇堿與別的組分到達基線， 實際塔板數按鹽酸水蘇堿計較大于 10000， 鹽酸水蘇堿保存工夫約為 10 分 鐘， 見表 2。陽性樣品溶液在色譜在響應地位無吸取峰， 可見陽性無滋擾。 0049 表 2 實際。

　　37、過， 即得。 0083 測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 0084 施行例 6 益母草膏含量測定辦法 0085 色譜前提與體系合用性實驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以甲醇 - 水 (10 90) 為活動相 ； 流速為每分鐘 0.2ml ； 蒸發光散射檢測器檢測 ( 漂移管溫度 ： 110， 氛圍流速 ： 3.0L/min)。 0086 比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 精細稱 定， 加活動相制成每 1ml 別離含 0.03mg、 0.18mg 的溶液。

　　13、0018 活動相的流速為每分鐘 0.1-1ml ； 蒸發光散射檢測器檢測的漂移管溫度 ： 60-130， 氛圍流速 ： 1.5-3.2L/min。 0019 強酸性陽離子交流樹脂柱的內徑 1 2cm， 柱高 5 10cm。 0020 制劑的取樣量為 ： 益母草顆粒取 0.1-2g， 益母草片及膠囊取 0.05-0.5g， 益母草 流浸膏取 2-10g， 益母草膏取 0.2-1.5g， 益母草口服液量取 0.5-5ml， 益母草打針液量取 0.1-1ml， 其他益母草制劑取樣量按含益母草生藥量 0.1-4g 而定取樣量。 0021 本創造中所述的益母草制劑是指益母草作為質料藥或質料藥之一， 根據。

　　儀器：日本島津LC-10Atvp高效液相色譜儀，威瑪龍色譜事情站；美國奧泰ELSD 2000ES蒸發光散射檢測器；梅特勒-托利多AB265-S電子天平。

　　29、.05mg、 0.2mg 的溶液， 即得。 0062 供試品溶液的制備取益母草粉末 0.2g， 置具塞錐形瓶中， 參加乙醇 50ml， 密塞， 稱定重量， 加熱回流 0.5 小時， 放冷， 再稱定重量， 加乙醇補足減失的重量， 搖勻， 濾過。量 取續濾液 20ml， 水浴蒸干， 殘渣加活動相使消融， 轉移至 10ml 量瓶并稀釋至刻度， 搖勻， 用 0.45m 的微孔濾膜濾過， 即得。 0063 測定法別離汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注 入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 0064 施行例 2 益母草顆粒含量測定辦法 0065 色。

　　活動相的流速為每分鐘0.1-1ml；蒸發光散射檢測器檢測的漂移管溫度：60-130 ℃，氛圍流速：1.5-3.2L/min。

　　44、， 搜集洗 脫液， 蒸干， 殘渣加活動相消融， 并轉移至 10ml 量瓶中， 加活動相至刻度， 搖勻， 用微孔濾膜 (0.45m) 濾過， 即得。 0103 測定法別離精細汲取上述兩種濃度的比較品溶液各 20l， 供試品溶液 5 20l， 注入液相色譜儀， 測定， 用外標兩點法對數方程計較， 即得。 0104 施行例 10 益母草藥材含量測定辦法 0105 色譜前提與體系合用性實驗 ： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以乙腈 - 水 (1 99) 為活動相 ； 流速為每分鐘 1ml ； 蒸發光散射檢測器檢測 ( 漂移管溫度 ： 130， 氛圍 流速 ： 3.2L/min)。 0106 比較。

　　益母草，別號茺蔚、坤草，是一種草本動物。性微寒，味苦辛，可去瘀生新， 活血調經，利尿消腫，是歷代醫家用來醫治婦科病之要藥。當代醫學研討證實， 益母草含益母草堿、鹽酸水蘇堿、益母草定、益母草寧等多種生物堿及苯甲酸、氯 化鉀等。據當代臨床及植物施行證實，益母草浸膏及煎劑對子宮有強而耐久的鎮靜 感化，不單能加強其膨脹力，同時能進步其慌張度和膨脹率。

　　5、 益母草制劑的含量測定辦法 ： 色譜前提與體系合用性實驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑 ； 以 2-12 98-88 的甲 醇 - 水為活動相 ； 流速為每分鐘 0.1-1ml ； 蒸發光散射檢測器檢測， 漂移管溫度 ： 60-130， 氛圍流速 ： 1.5-3.2L/min ； 比較品溶液的制備 取枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當， 精細稱定， 加活動相制成 每 1ml 別離含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即得 ； 供試品溶液的制備 取益母草制劑內容物， 研細， 混勻， 精細稱取或量取適當， 置 100ml 燒杯中， 加熱水 10-50ml 使消融， 用稀鹽酸調 pH 值至 1 3。

　　比較品溶液的制備取五氧化二磷枯燥至恒重的鹽酸水蘇堿比較品適當，精細 稱定，加活動相制成每1ml別離含0.03mg、0.18mg的溶液，即得。

　　色譜前提與體系合用性實驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以甲醇-水 (10∶90)為活動相；流速為每分鐘0.2ml；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度： 110℃，氛圍流速：3.0L/min)。

　　26、塔板數、 別離度、 保存工夫數據 0050 0051 考查了甲醇 - 水和乙腈 - 水等差別的活動比擬例及差別的活動相流速， 成果活動 相為乙腈 - 水 (1-10 99-90) 或甲醇 - 水 (2-12 98-88)， 流速為每 1 分鐘 0.1ml 至 1ml， 鹽酸水蘇堿均能別離 ； 以活動相為乙腈 - 水 (2-8 98-92) 或甲醇 - 水 (4-8 96-92)， 流 說 明 書 CN 101474249 B5/8 頁 7 速為每 1 分鐘 0.2ml 至 0.8ml， 結果更優。 0052 比較品純度查抄 ： 含量為 99.07， 契合含量測定請求， 計較時按 100計較。線、 性干系考查 ： 回歸方程為 ： LnA 1.58LnC+13.84， r 0.9992。表白鹽酸水蘇堿進樣量在 0.4004 4.004g 范疇外線性干系優良。精細度實驗 ： 均勻值為 3245634， RSD 為 0.52， 表白精細度較好。不變性實驗 ： 表白供試品溶液在 72h 內不變性較好。反復性實驗 ： 均勻 值為 19.58mg/ 袋， RSD 為 0.97， 表白辦法反復性較好。加樣收受接管率實驗 ： 均勻收受接管率為 99.82， RSD 為 1.00， 表白辦法收受接管率較好。 0053 施行例 3 ： 益母草制劑含量測定 0054 按手藝計劃中益母草制劑的含量測定項下依法測定各制劑樣。

　　色譜前提與體系合用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以乙腈-水 (7∶93)為活動相；流速為每分鐘0.2ml；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度：90 ℃，氛圍流速：2.8L/min)。

　　色譜前提與體系合用性實驗以十八烷基或辛烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以 1-10∶99-90的乙腈-水或2-12∶98-88的甲醇-水為活動相；蒸發光散射檢測器檢測。

　　樣品：益母草顆粒(批號：1508001)及缺益母草藥材的陽性對還是品，廣西靈 峰藥業有限公司。

　　供試品溶液的制備取益母草打針液，混勻，精細量取0.5ml，置100ml燒杯中， 加水10ml稀釋，用稀鹽酸調pH值至1～3，經由過程已處置好的強酸性陽離子交流樹脂 柱(內徑1cm，柱高5cm)，用水50ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水(70∶30) 50ml洗脫，搜集洗脫液，蒸干，殘渣加活動相消融，并轉移至10ml量瓶中，加流 動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

　　比較品溶液的制備取鹽酸水蘇堿比較品適當，精細稱定，加活動相制成每1ml 別離含0.03mg、0.15mg的溶液，即得。

　　按手藝計劃中益母草制劑的含量測定項下依法測定各制劑樣品，之外標兩點法 對數方程計較樣品中鹽酸水蘇堿的含量，成果見表3。